您好,歡迎來到上海研謹(jǐn)生物科技有限公司!
13585717991
021-65232515
小鼠脾臟淋巴細(xì)胞分離液試劑盒LTS1092PK
小鼠脾臟淋巴細(xì)胞分離液試劑盒說明書
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:
| 名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
|
|
|
|
A | XXXX 動物脾臟組織淋巴細(xì)胞分離液 |
| 200ml |
|
|
|
|
B | 樣本稀釋液(贈品) | 2010C1119 | 200ml |
|
|
|
|
C | 清洗液(贈品) | 2010X1118 | 200ml |
|
|
|
|
D | F 液(贈品) | F2013TBD | 200ml |
|
|
|
|
E | 說明書 |
| 1 份 |
|
|
|
|
【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
A. 適用儀器
zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B. 耗材
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號 | 產(chǎn)地 |
|
|
|
|
| 15ml 離心管散裝 | 339650 | 美國 NUNC |
|
|
|
|
| 15ml 離心管架裝 | 339651 | 美國 NUNC |
|
|
|
|
| 50ml 離心管散裝 | 339652 | 美國 NUNC |
|
|
|
|
| 50ml 離心管架裝 | 339653 | 美國 NUNC |
|
|
|
|
| 無菌膠頭滴管或塑料滴管 |
|
|
|
|
|
|
【檢驗(yàn)方法】 |
|
|
全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
1. 首先制備脾臟組織單細(xì)胞懸液,制備方法詳見“脾臟組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。
2. 取一支 15ml 離心管,加入與脾臟組織單細(xì)胞懸液等量的分離液(注:分離液zui少不得 少于 3ml)。
3. 用吸管小心吸取脾臟組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上,400-500g,離心 20-30min。(注: 根據(jù)脾臟組織單細(xì)胞懸液量確定離心條件,脾臟組織單細(xì)胞懸液量越大,離心力越大, 離心時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達(dá)到分離效果)。
4. 離心后,此時離心管中由上至下分為四層。*層為稀釋液層。第二層為環(huán)狀乳白色淋 巴細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。
5. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色淋巴細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中,向離心管中加入 10ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。
6. 250g,離心 10min。
7. 棄上清。
8. 用吸管以 5ml 清洗液(產(chǎn)品編號:2010X1118)重懸所得細(xì)胞。
9. 250g,離心 10min。
10. 重復(fù) 7、8、9,棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。
【注意事項(xiàng)】
1. 全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,zui 好在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),樣品存放時間越長,細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后 分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
2. 本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
3. 吸取過多的淋巴細(xì)胞層及分離液層會導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的粒
細(xì)胞數(shù)量增加。
4. 分離液用量大于脾臟組織單細(xì)胞懸液樣本時,分離效果更佳。
5. 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低,請以尋求幫助,具體詳 見下方生產(chǎn)企業(yè)信息。
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存,有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
封后置常溫保存。如 4℃保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
【參考值(參考范圍)】
本實(shí)驗(yàn)淋巴細(xì)胞提取率及純度均大于 80%。
下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。
| 紅細(xì)胞 |
| 白細(xì)胞 | 血小板 |
| |
|
|
|
|
|
|
|
含量(個/L) | (4.0-5.5)×1012 | (4.0-10.0)×109 | (1.0-3.0)×1011 |
| ||
中性粒細(xì)胞 | 淋巴細(xì)胞 | 單核細(xì)胞 | ||||
|
|
|
| |||
|
|
|
|
|
|
|
50%-70% 20%-40% 3%-8%
【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】
1. 脾臟組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)。
2. 所獲得淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
3. 所獲得淋巴細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
4. 所獲得淋巴細(xì)胞的鑒定方法 A.流式細(xì)胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索“細(xì)胞分離、
純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”,并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。
【可能存在的問題及解決方法】
1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 | 建議解決方案 |
|
|
|
|
|
離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 |
|
|
|
| |
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 | ||
|
| ||
|
|
|
|
離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 |
|
|
|
| |
離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細(xì)胞密度過小 | ||
|
| ||
|
|
|
|
2. 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,恒定離 心時間,對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
3. 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可 能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注:在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù),直至達(dá)到分離效果,
離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。