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LLC+luc小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

,LLC/luc

貨號(hào)：YJ-0078a（LLC種屬鑒定）

價(jià)格： 3200.0

規(guī)格： 1x10⁶

細(xì)胞描述

Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細(xì)胞系，該細(xì)胞帶有原發(fā)性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤，被廣泛用作轉(zhuǎn)移的模型，可用于研究癌癥化學(xué)治療劑的機(jī)制。

該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

來(lái)源：小鼠肺癌組織

形態(tài)：半貼壁生長(zhǎng)，混合形態(tài)，有上皮細(xì)胞樣，松散貼壁或懸浮有梭形、圓形等細(xì)胞形態(tài) 。

含量：含量：>1x10⁶  細(xì)胞數(shù)

規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途：僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

建議收到細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1) 準(zhǔn)備：1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦：YJ-0002)，優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S 1 %

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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